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金刚烷胺检测试剂盒样本前处理及实验步骤
发布时间:2019-09-27   点击次数:18次

金刚烷胺检测试剂盒样本前处理及实验步骤

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知:

实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液:

配液1:复溶液

    将2×复溶液V去离子水:V复溶液=1:1稀释,用于样本的复溶,复溶液在4℃环境可保存一个月。

5。3 样本前处理步骤:

5.3.1 组织样本处理方法:

1)称取均质后的组织样本3±0.05g,加入6ml乙腈、1g无水硫酸钠,充分振荡3min,室温4000r/min以上离心10min。

2)取上清液2ml在50-60℃条件下氮气或空气流吹至完全干燥。

3)加入0.5ml 复溶液、0.5ml正己烷混合振荡30s于4000r/min以上离心5min,除去上层,取下层液体100µl进行分析。

样本稀释倍数:0.5    检测下限:0.5ppb

6 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

实验开始前,用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。

6。1 编    号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。

6.2 加样反应:加标准品或样本100µl/孔到各自的微孔中,然后加抗体工作液50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光反应30分钟。

6.3 洗    涤:将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,最后用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)

6.4 加酶反应:加酶标记物100µl/孔,25℃避光反应30分钟。

6.5 洗    涤:同上

6。6 显    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。

6.7 终    止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。

6.8 测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。

 

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