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猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒操作步骤
发布时间:2019-09-27   点击次数:38次

猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒操作步骤

猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒原理

 本试剂盒系由预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪瘟病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪瘟病毒抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪瘟病毒抗体。

 

猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒操作步骤

1。使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2。取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀,置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7。洗涤,同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。

9。每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4。浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7。试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

 

 

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