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鸡补体因子BELISA检测试剂盒操作影响结果原因和解决办法
发布时间:2019-09-26   点击次数:8次
鸡补体因子BELISA检测试剂盒是基于固相酶联免疫检测的原理,可以在1.5个小时内迅速检测人的血清或者血浆中补体H因子变异体的含量。其检测方法是用分光光度计检测450nm处的吸光值即可。
 
鸡补体因子BELISA检测试剂盒操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法
1选择试剂选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡至少30分钟。
 
2加样可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);
3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1)标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2)加样后及时放入孵箱。
3)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4)如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5)标本较多时,请分批操作。  
 
3孵育可能原因:
1)孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底;
2)孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
解决办法:
1)贴封片或加盖;
2)按说明步骤严格控制操作时间。
 
4洗板可能原因:
1)采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2)采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。
3)反应板过多造成洗板等待时间长。
解决办法:
1)保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2)合理安排,或多用几台洗板机。
 
5显色可能原因:
1)显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2)加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
解决办法:
1)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用;
2)加样时保持显色剂不外流;
3)A、B液应避免接触金属器械。
 
6终止可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
 
7读板如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
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