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环丙沙星ELISA检测试剂盒样本前处理及各大类样本处理方法分析
发布时间:2019-09-12   点击次数:67次

环丙沙星ELISA检测试剂盒样本前处理及各大类样本处理方法分析

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知:

实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液:

配液1:0.15M盐酸溶液

    取5ml浓盐酸,加入去离子水中定容到400ml。

配液2:样本提取液

    量取10ml 0.15M盐酸溶液(配液1)加入到90ml无水乙腈中混合均匀。

配液3:复溶液

    将5×复溶液用去离子水5倍稀释,用于样本的复溶,复溶液在4℃环境可保存一个月。

5.3 样本前处理步骤:

5.3.1 动物组织(鸡肉、猪肉、鱼、虾)处理方法

1)称2。0±0。05g 均质过的组织样本于50ml离心管中;

2)加入8ml样本提取液(配液2),振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;

3)取2ml清澈上层有机相至洁净干燥的10ml玻璃试管中,50-60℃水浴氮气吹干;

4)加入1ml正己烷,振荡2分钟,再加1ml复溶液(配液3),振荡30秒,室温4000转/分离心5分钟;

5)去除上层正己烷,取下层水相50µl液体用于分析。

样本稀释倍数:2    检测下限:0。3ppb

5.3.2 蜂蜜处理方法

1)取1。0±0。05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯离心管中,加6ml样本提取液(配液2),振荡5分钟,使其充分溶解;

2)加入3ml复溶液(配液3),加入11ml二氯甲烷,振荡5分钟,室温4000转/分,离心5分钟;

3)吸去上层,取下层有机相8ml至干燥溶器中,50-60℃水浴氮气吹干;

4)用1ml复溶液溶解干燥的残留物,再加入正己烷1ml混合30秒,室温3000转/分以上,离心5分钟;

5)去除上层取下层50µl液体用于分析。

样本稀释倍数:2    检测下限:0.4ppb

5.3.3 牛奶处理方法:

1)取25µl样本液与475µl复溶液(配液3)混合,振荡1分钟,使其充分溶解;

2)取50µl液体用于分析。

样本稀释倍数:20    检测下限:3ppb

5.3.4 奶粉处理方法:

1)称取0。5±0。02g均质物至10ml聚苯乙烯离心管中,加入5ml去离子水,振荡,使其充分溶解;

2)取100µl样本液与400µl复溶液(配液3)混合,振荡1分钟;

3)取50µl液体用于分析。

样本稀释倍数:50    检测下限:6ppb

5.3.5 鸡蛋处理方法:

1)称取1.0±0.02g均质物至10ml聚苯乙烯离心管中,加入5ml去离子水,振荡,使其充分溶解;

2)取100µl样本液与400µl复溶液(配液3)混合,振荡1分钟;

3)取50µl液体用于分析。

样本稀释倍数:30    检测下限:3ppb

 

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